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原位杂交 (ISH)

2018-04-27


原位杂交 (ISH) 是用于定位固定组织和细胞中特定核酸靶标的强大技术,能够获得与基因表达和遗传位点相关的时间和空间信息。虽然 ISH 的基本工作流程与印迹杂交近似,即核酸探针被合成、标记、纯化和特异性靶标杂交,但其不同之处在于前者可通过显示组织内的结果来获得更多信息。如今有两种基本方法来实现显示原位 RNA 和 DNA 靶标,即荧光 (FISH) 和显色 (CISH) 检测。每种检测方法本身的特点(见下表)使得 FISH 和 CISH 适用于截然不同的应用。虽然两种方法均使用标记的、与样本杂交的靶标特异性探针,但每种方法用于可视化显示样本的仪器不同。这里我们将强调每种方法的不同之处和各自的优势。

原位杂交方法的特点

技术仪器/可视化方法主要优势主要应用
CISH明视野显微法能够同时查看 CISH 信号和组织形态学分子病理学诊断
DNA-FISH荧光显微法多重复用:在同一样本中直观显示多个靶标基因存在、拷贝数和位置;突变分析
RNA-FISH荧光显微法、HCS 和流式细胞分析多重复用:在同一样本中直观显示多个靶标基因表达、RNA 的时间和空间定位



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