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IHC、ELISA和WB区别

2021-09-03

免疫学三大工具,IHC、Western blot、ELISA,分别用于定位,定性和定量!

IHC(免疫组化)

是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等),通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色,来对组织(细胞)内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织,要在显微镜下观察结果,可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。

ELISA(酶联免疫吸附试验)

用到了免疫学原理和化学反应显色,待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液,因而没有用到组织包埋、切片等技术,这是与免疫组化的主要区别,操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面,从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上,这就是“吸附”的含义。

免疫组化和elisa所用到的原理大致相同,只是因为所检测的样品不同,从而在操作方法上有所不同。elisa多用于定量分析,其灵敏度非常高。

Western bolt (蛋白质印迹法)

先要进行SDS-PAGE,然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上,而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品,可以用于定性和半定量。

【1】.对于IHC来说,定位是免疫组化*大的优势

该方法可在组织和细胞中进行抗原的准确定位, 因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察,这样就可以进行形态与功能相结合的研究,相比于其他蛋白检测方法,免疫组化具有定位较直接准确、定性灵敏度高,是定位检测分析**方法对病理学领域开展深入研究是十分有意义,尤其对于有些因子的转位研究十分有用。

【2】WB与IHC技术相比,定量可能更加准确


当然WB也可定性和定位(通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量,进而间接反映它们的定位),但敏感性远远低于IHC。


【3】ELISA与IHC相比,定量*准确,是分泌性蛋白检测**方法之一。


尤其对于微定量分析多个样本非常有用,所用试剂和样品量很少,结果精确。IHC针对性比较强,而且一般是以组织或者细胞为样本,而ELISA一般是使用血清或者组织磨碎液。免疫组化可以快速检测样本中抗体的阳性或者阴性,一般不用于定量检测。


【4】WB和ELISA的区别


western blotting:可以看到特异性的条带,但是定量比较烦


ELISA:可以直接读出浓度,但是如果抗体有非特异性结合,那得到的数值就不可信。


WB:只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点elisa做不到


ELISA:可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响


WB:所检测的一般是抗原,而elisa抗原抗体都可以检测。


WB:所检测的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚体、降解产物等,一句话,WB可以确定所用抗体是与哪种蛋白起作用的;而elisa无能为力,一锅端了。


WB:所适用的一抗一般是线性位点的,elisa线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意义上讲,WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定,而elisa不行。


WB:一次处理量就是一块胶版,10-20个样品*多了。elisa一块96孔板一次可以处理96个样本,可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。


WB:操作常见的非特异性条带,膜本底差,显色不好等等缺点在elisa上表现得要好得多。



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