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实验中心

RT-PCR 实验

2017-06-21

逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription PCR,RT-PCR),是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,利用变性,退火和延伸多步骤、多循环来扩增目的DNA片段。在该反应过程中,目的DNA产量呈指数增长,使一些极为微量RNA样品检测成为可能。

  

实验步骤:


     1. 样品获取、处理和制备

              1.1 悬浮细胞:将悬浮细胞1×106 个/mL培养液倒入离心管中,离心沉淀细胞。PBS冲洗2次,将细胞离心底部,向离心管中加入500-1000μl Trizol,然后置于-80度冰箱保存。或者将离心底部的干细胞置于-80度冰箱保存。

              1.2 贴壁细胞:用胰酶消化细胞1×106个/mL,离心PBS冲洗2次,将细胞离心底部,向离心管中加入500-1000μl Trizol, 然后置于-80度冰箱保存。或者将离心底部的干细胞置于-80度冰箱保存。

              1.3 组织:采集新鲜组织100mg,放入离心管中,做好标记,于液氮冷冻片刻后,置于-80度冰箱保存。

              1.4 血液:用抗凝管收集的全血1mL,加入RNA保护剂,做好标记,置于-80度冰箱保存。

    2. RNA或DNA质控

    3. 反转录

    4. PCR扩增

    5. 琼脂糖凝胶电泳


  我们提供:


  1. 抽取的RNA和电泳图及逆转录的cDNA样本

  2. 操作步骤及详细的试剂和耗材

  3. 引物序列

  4. 琼脂糖电泳图

  5. 原始数据及处理后的正式实验数据

 

 结果示意图:

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服务周期: 


服务内容

说明

价格

实验周期

RT-PCR

提供目的基因片段

120元/基因/样

7个工作日

 

  温馨提醒:


      1.  细胞样本106以上,收集后-80度保存;组织标本100mg标本;血清或血液1mL以上,干冰运输

      2.  单基因10个样本以上

      3.  试验周期不包括探针、标准品合成时间

      4.  公司默认的抽提方式TRIZOL,如果需要试剂盒抽提,则需要客户提供

      5.  标本公司免费保存一个月,一个月以后自行处理,如果需要邮寄,则需要客户付邮寄费用。



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