即用 PCR 扩增试剂盒(Taq,含染料)
产品描述 Taq PCR Master Mix (2X, 蓝色染料)是 一种即用型的溶液,含有 Taq DNA 聚合酶、 dNTP、MgCl2、PCR buffer、PCR 稳定剂、 凝胶上样缓冲液和蓝色染料(溴酚蓝),因此,PCR 产物在 PCR 结束后可以直接进行琼脂 糖凝胶电泳。产品目标是节省建立 PCR 反应 的时间和降低污染的的风险。优化的 Taq PCR Master Mix (2X, 蓝色染料)能从 λDNA 扩增长达 5 kb 的片段。用户只需加入模板、 水及引物即可建立 PCR 反应。 提供的 25 mM Mg2+用于重新优化 PCR 体系,以期获得理想的 PCR 产物。产品订购信息:产品名称产品编号规格储存 价格 促销价格即用 PCR 扩增试剂盒(Taq,含染料)Q2453S20RXNS -20°C188.00128.00即用 PCR 扩增试剂盒(Taq,含染料)Q2453M100RXNS -20°C718.00498.00试剂盒组成 组分20RXNS100RXNSTaq PCR Master Mix (2X, blue dye)0.5 ml5×0.5 ml Sterilized ddH2O1.0 ml5×1.0 mlMgCl2 (25 mmol/L )0.5 ml1.0 ml操作手册1 份1 份保存方法及稳定性4°C 运输,-20°C 保存。.实验方法1. 根据以下方案优化模板浓度。 gDNA 1~10 µg/ml plasmid DNA 0.1~1 µg/ml 2. 优化引物浓度:0.2~0.5 µM的引物浓度 适用于大多数PCR扩增反应。3. 试剂于冰上溶解。4. 根据下表准备反应体系:组分体积终浓度Taq PCR Master Mix25 µl1×DNA template1 µl1~10 µg/ml gDNA ; 0.1~1 µg/ml pDNA Primer F (10 µmol/L)2 µl0.4 µMPrimer R (10 µmol/L)2 µl0.4 µMSterilized ddH2O补足至 50 µl5. 将反应管置于离心机中离心 30~60 s。6. 如果使用的热循环仪没有热盖功能,用 矿物油覆盖反应液。7. 大多数PCR反应可使用下列循环程序:Pre-Duration94°C4 min1 CycleDuration94°C30 s 30-35 cyclesAnneal45~68° C30 sExtend 72°C1 kb/minPost-Extend72°C10 min1 cycle4°C4 °C常见问题指南一 ,产物少或无 : 1, 模板浓度过低;实验样品 DNA 损伤或降解。2, 引物设计不完善。3, 热循环条件未优化;退火温度过低或过高;延伸时间太短;循环次数太少。4, 引物浓度过低; Mg2+ 浓度未优 化。5, 模板质量太差。二 ,产物为多条带1, 引物设计不完善。2, 引物浓度未优化或降解。3, 退火温度过低。4, PCR 循环条件未优化。三 ,产物有污染 :1,初始模板用量过多。2,Mg2+ 浓度未优化 。3,PCR 中的长片段来源于长的基因组 DNA。4,携带污染。5,引物设计不完善。