实验方法原理凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术＊初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RN**段和寡核苷酸片段（特异）， 和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。实验材料DNA样品试剂、试剂盒[γ-32P]ATPT4多聚核苷酸激酶Nuclease-Free WaterT4多聚核苷酸激酶缓冲液醋酸铵TE无水乙醇TBE buffer重蒸水甲叉双丙烯酰胺丙烯酰胺甘油过硫酸铵TEMED（四甲基乙二胺）EMSA Gel-Shift结合缓冲液溴酚蓝仪器、耗材水浴锅PCR仪离心机电泳仪电泳槽实验步骤一、探针的标记 1.   如下设置探针标记的反应体系： （1）待标记探针 (1.75 pmol/微升) ：2微升。 （2）T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) ：1微升。 （3）Nuclease-Free Water ：5微升。 （4）[γ-32P]ATP(3 000 Ci/mmol at 10 mCi/ml) ：1微升。 （5）T4 Polynucleotide Kinase (5-10 u/微升) ：1微升。 （6）总体积 10微升 （7）按照上述反应体系依次加入各种试剂，加入同位素后，Vortex混匀，再加入T4 Polynucleotide Kinase，混匀。 2.   使用水浴或PCR仪，37℃反应10分钟。 3.   加入1微升探针标记终止液，混匀，终止探针标记反应。 4.   再加入89微升TE，混匀。此时可以取少量探针用于检测标记的效率。通常标记的效率在30%以上，即总放射性的30%以上标 记到了探针上。为实验简便起见，通常不必测定探针的标记效率。 5.  标记好的探针**立即使用，＊长使用时间一般不宜超过3天。标记好的探针可以保存在-20℃。 二、 探针的纯化 通常为实验简便起见，可以不必纯化标记好的探针。在有些时候，纯化后的探针会改善EMSA的电泳结果。如需纯化，可以按照如 下步骤操作： 1.  对于100微升标记好的探针，加入1/4体积即25微升的5 M醋酸铵，再加入2体积即200微升的无水乙醇，混匀。 2.   在-70℃至-80℃沉淀1小时，或在-20℃沉淀过夜。 3.  在4℃，12 000 g-16 000 g离心30分钟。小心去除上清，切不可触及沉。 4.   在4℃，12 000 g-16 000 g离心1分钟。小心吸去残余液体。微晾干沉淀，但不宜过分干燥。 5.   加入100微升TE，完全溶解沉淀。标记好的探针**立即使用，＊长使用时间一般不宜超过3天。标记好的探针可以保存在 -20℃。 三、EMSA 胶的配制 1.   准备好倒胶的模具。可以使用常规的灌制蛋白电泳胶的模具，或其它适当的模具。**选择可以灌制较薄胶的模具，以便于干胶等后续操作。为得到更好的结果，可以选择可灌制较大 EMSA 胶的模具。 2.   按照如下配方配制20毫升4％的聚丙烯酰胺凝胶(注意：使用29:1等不同比例的Acr/Bis对结果影响不大)。 （1）TBE buffer (10X)： 1毫升。 重蒸水 16.2毫升。 （2）39:1 acrylamide/bisacrylamide (40%,w/v)： 2毫升。 （3）80% 甘油： 625微升。 （4）10% 过硫酸铵 (ammonium persulfate) ：150微升。 （5）TEMED ：10微升 3.  按照上述次序加入各个溶液，加入TEMED前先混匀，加入TEMED后立即混匀，并马上加入到制胶的模具中。避免产生气泡， 并加上梳齿。如果发现非常容易形成气泡，可以把一块制胶的玻璃板进行硅烷化处理。 四、EMSA结合反应 1.   如下设置EMSA结合反应 阴性对照反应： (1）Nuclease-Free Water ：7微升。 （2）EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) ：2微升。 （3）细胞核蛋白或纯化的转录因子： 0微升。 （4）标记好的探针 ：1微升。 （5）总体积 ：10微升。 样品反应： （1）Nuclease-Free Water ：5微升。 （2）EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) ：2微升。 （3）细胞核蛋白或纯化的转录因子 ：2微升。 （4）标记好的探针： 1微升。 （5）总体积： 10微升。 探针冷竞争反应： （1）Nuclease-Free Water ：4微升。 （2）EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) ：2微升。 （3）细胞核蛋白或纯化的转录因子： 2微升。 （4）未标记的探针： 1微升。 （5）标记好的探针： 1微升。 （6）总体积 ：10微升。 突变探针的冷竞争反应： （1）Nuclease-Free Water ：4微升。 （2）EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) ：2微升。 （3）细胞核蛋白或纯化的转录因子 ：2微升。 （4）未标记的突变探针： 1微升。 （5）标记好的探针： 1微升。 （6）体积 ：10微升 Super-shift反应： （1）Nuclease-Free Water：4微升。 （2）EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) ：2微升。 （3）细胞核蛋白或纯化的转录因子：2微升。 （4）目的蛋白特异抗体 ：1微升。 （5）标记好的探针：1微升。 （6）总体积 ：10微升。 2.   按照上述顺序依次加入各种试剂，在加入标记好的探针前先混匀，并且室温(20-25℃)放置10分钟，从而消除可能发生的探针和蛋白的非特异性结合，或者让冷探针优先反应。然后加入标记好的探针，混匀，室温(20-25℃)放置20分钟。 3.   加入1微升EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(无色，10X)，混匀后立即上样。注意：有些时候溴酚蓝会影响蛋白和DNA的结合，建 议尽量使用无色的EMSA/Gel-Shift上样缓冲液。如果对于使用无色上样缓冲液在上样时感觉到无法上样，可以在无色上样缓冲液里面添加极少量的蓝色的上样缓冲液，至能观察到蓝颜色即可。 五、 电泳分析 1.  用0.5XTBE作为电泳液。按照10V/厘米的电压预电泳10分钟。预电泳的时候如果有空余的上样孔，可以加入少量稀释好的1X 的EMSA上样缓冲液(蓝色)，以观察电压是否正常进行。 2.   把混合了上样缓冲液的样品加入到上样孔内。在多余的某个上样孔内加入10微升稀释好的1X的EMSA/Gel-Shift上样缓冲液 (蓝色)，用于观察电泳进行的情况。 3.   按照10 V/厘米的电压电泳。确保胶的温度不超过30℃，如果温度升高，需要适当降低电压。电泳至EMSA/Gel-Shift上样缓 冲液中的蓝色染料溴酚蓝至胶的下缘1/4处，停止电泳。 4.   剪一片大小和EMSA胶大小相近或略大的比较厚实的滤纸。小心取下夹有EMSA胶的胶板，用吸水纸或普通草纸大致擦干胶板边 缘的电压液。小心打开两块胶板中的上面一块(注：通常选择先移走硅烷化的那块玻璃板)，把滤纸从EMSA胶的一侧逐渐覆盖住整个EMSA胶，轻轻把滤纸和胶压紧。滤纸被胶微微浸湿后(大约不足1分钟)，轻轻揭起滤纸，这时EMSA胶会被滤纸一起揭起来。把滤纸侧向下，放平，在EMSA胶的上面覆盖一层保鲜膜，确保保鲜膜和胶之间没有气泡。 5.  干胶仪器上干燥EMSA胶。然后用X光片压片检测，或用其它适当仪器设备检测。

多肽订制类型：普通线性肽，链长至140个氨基酸，克级到百克级，纯度达99%简单修饰肽：提供N端乙酰化，末端酰胺化特殊荧光标记肽（FAM、FITC、Rodamine、HYNIC，等等）双荧光标记、光淬灭基团标记（EDANS，DABCYL）、磷酸肽（Ser、Thr、Tyr) ，磺酸肽含特殊氨基酸肽：含有D型氨基酸及各种氨基酸衍生物生物素标记肽（BIOTIN）、复合抗原肽（MAP4，MAP8，MAP16分支）小分子化合物修饰、PEG修饰、甲基化修饰、侧链修饰等脂肽、脂肪酸修饰(Pal、Myr），环肽（酰胺环、二硫键环及定点成环）抗原肽：KLH，BSA，OVA等蛋白交联纯度范围：粗品、脱盐，＞75%、＞80%、＞85%、＞90%、＞95%、＞98%多肽价格：AmountCrudeDesalted>75%>80%>85%>90%>95%>98%1-4 mg293763677175791025-9 mg3240707480848811510-14 mg34437984909510012915-19 mg3747909610210811314720-24 mg40519910611311912616525-29 mg445511011712413113817930-39 mg496012012813614415219840-49 mg546513013914815616521550-59 mg607114415316417318223860-79 mg667616016918219220126280-100 mg73841851972112222333041000 mg230268550588633665704915交货周期：50条或50条以下的普通粗品多肽在2周内交货，50条或50条以下纯化肽将在3周内交货；50条以上或者复杂多肽交货时间相应延长。价格优惠：一次订单超过10条肽的或价值超过10000元人民币的订单，或**合作定制多肽的客户享受较大折扣。产品报告：产品将附完整的检测报告，包括：HPLC图谱；质谱。多肽交联：内容周期（天）单价（元）备注多肽多肽交联KLH2150交联2mgKLH/一只兔子多肽交联BS2150交联2mgBSA/一只兔子

我们的激酶测定法可测量化合物对激酶活性的影响。激酶筛选可以低，中和高通量的方式进行。我们的自由选择设置使客户可以从我们的产品组合中选择激酶的一部分，以测试任意数量的化合物。高通量激酶筛选可用于cherry-picking，化合物管理和IC50跟踪选项。 蛋白质激酶测定法采用基于金标准放射性同位素的测定法形式，可提供可再现的高质量数据，直接测量酶的活性，这意味着您无需担心其他检测形式引起的假阳性和阴性。 可以使用ATP竞争性，底物竞争性和变构抑制剂进行激酶筛选。我们的许多激酶测定无需修饰即可适用于任何蛋白质或肽底物。 我们的放射性激酶测定可准确测量酶的活性。测试物质的激酶筛选结果以抑制百分比或IC50值的形式提供。将您的测试物质发送给我们，我们将提供全面的分析和筛选结果。HotSpot™和33 PanQinase™：两种放射性测定形式我们提供了两种放射性测定形式，可在美国和德国的筛选设施中进行。两种测定均基于33 P标记的磷酸盐从ATP向激酶底物的转移。然而，该方法在磷酸化底物的保留和检测方面有所不同。通过将反应混合物点样在滤膜上，可以捕获HotSpot™分析中的蛋白质和多肽（在美国执行）。在33 PanQinase™测定（在德国进行）与的FlashPlate微量滴定板，涂有闪烁体检测进行。优势：辐射测定法格式是激酶筛选的金标准，可产生可再现的高质量数据，并直接测量酶活性。直接检测到催化产物（磷酸化的肽或蛋白质）。避免了由间接检测格式引起的误报和漏报。 既HotSpotTM 和 33PanQinaseTM测定法允许 检测 ATP-的作为 以及 作为 底物 的竞争和变构 抑制剂。HotSpot™分析无需修饰即可适用于任何蛋白质或肽底物。 下载有关“激酶分析和筛选-选择生化分析平台”的全面概述美国测试：设置：单次重复筛查或5或10个浓度的IC50值测定。其他筛选格式可根据要求提供。 ATP浓度： 1 uM，10 uM或表观ATP-Km至100 uM对照：无抑制剂对照（DMSO载体），对于每种激酶，均以10剂量IC50格式测试一种激酶特异性对照化合物。 周转时间：标准项目为10个工作日。可以在研究开始之前安排快速的日程安排和数据传送。 报告：原始数据，酶活性百分比和对照化合物IC50值将以Excel格式报告，用于单剂量测定。对于IC50订单，原始数据，IC50值和曲线拟合将以Excel格式提供。 可根据要求提供测定条件，靶标和底物信息。在开始研究之前，应注意此信息的要求。化合物要求：简而言之，对于激酶少于50个的标准项目，需要20ul的10mM DMSO原料或固体物质。德国测试：设置：单剂量筛选或10种浓度的IC50值测定。其他筛选格式可根据要求提供。ATP浓度：表观ATP-Km控件：仅DMSO控件。周转时间：标准项目为10个工作日。可以在研究开始之前安排快速的安排和数据传送报告：将提供详细的报告，包括测定条件，靶标和底物信息。原始数据和酶活性％将在Excel中报告，包括IC50值和曲线拟合（如果适用）。 化合物要求：简而言之，对于少于33种激酶的标准项目，应使用100 µl储备液或＊高分析浓度的100x固体物质。通过选择我们715种激酶的任意组合创建您自己的激酶分析，或选择我们的每月激酶组：Wild Type Kinase Panel (376 Kinases)  Mutant Kinase Panel  (289 Kinases)   Atypical Kinase Panel (24 Kinases)  Lipid Kinase Panel (17 Kinases)  All Kinase Assays  (Full Kinase Panel:715)Not included in any panel (9 kinases)需要咨询更多信息，请联系技术服务部  amandaTel：18221539964  邮箱：service@rebiosci.net

Reaction Biology的HMT专家组包括30多种用于筛选和分析的甲基转移酶测定，这使其成为业内*大的甲基转移酶组。所有甲基转移酶测定均基于使用3H AdoMet的放射性同位素。HMT HotSpot是**基于黄金标准放射性同位素的HMT检测服务，可用于分析和低成本HTS。它也是**可以使用核小体，组蛋白和肽作为底物的甲基转移酶技术。所有甲基转移酶蛋白质和底物都有生产，也可以单独购买。 可用于甲基转移酶检测的服务：1，大规模高通量筛选试验            2，大规模单剂量，重复分析服务     3，IC50分析服务 - 曲线拟合5或10剂量        4， 分析开发             需要咨询更多信息，请联系技术服务部   Jacky  Tel：18221539942    邮箱：jacky@rebiosci.net

Reaction Biology的HAT分析 是基于放射性同位素的过滤分析。无论底物是肽，组蛋白，核小体还是非组蛋白，都可以使用这种黄金标准方法。在人类蛋白质组中含有约1750个赖氨酸 - 乙酰化蛋白质，RBC的HAT Spectrum SM分析在分析灵活性和“黄金标准”质量方面提供了重要优势。 提供HAT服务：大规模高通量筛选试验大规模单剂量，重复分析服务IC50分析服务 - 曲线拟合5或10剂量Ki测定分析服务定制分析开发研究合作Name                                                                         Synonyms                                                 DateCBPCREBBPHDAC1HDAC1HDAC10HDAC10HDAC11HDAC11N/AHDAC2HDAC2HDAC3HDAC3HDAC4-Class2a subHDAC4-Class2aHDAC5-Class2a subHDAC5-Class2aHDAC6HDAC6HDAC7-Class2a subHDAC7-Class2aHDAC8HDAC8HDAC9-Class2a subHDAC9-Class2ahGCN5KAT2AKAT5KAT5MYST2MYST2MYST4MYST4Nuclear ExtractNuclear Extractp300p300pCAFKAT2BSIRT1SIRT1SIRT2SIRT2SIRT3SIRT3SIRT5SIRT5需要咨询更多信息，请联系技术服务部   Jacky  Tel：18221539942    邮箱：jacky@rebiosci.net

名称                   同义词                                                                                                                         数据KDM4AJMJD2AKDM4DJMJD2DKDM5AJARID1AKDM5BJARID1BKDM5CJARID1CKDM6BJMJD3LSD1赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1A，KDM1A需要咨询更多信息，请联系技术服务部   Jacky  Tel：18221539942    邮箱：jacky@rebiosci.net

名称                                                                                 同义词                                                                           数据PARP1PARP1PARP2ADPRT2PARP5BTNKS2需要咨询更多信息，请联系技术服务部   Jacky  Tel：18221539942    邮箱：jacky@rebiosci.net

  名称                                                      同义词                                                                                      数据DUSP22_MKPX双特异性蛋白磷酸酶22PP1A丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP1-α催化亚基，PPP1CAPP1B丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP1-β催化亚基，PPP1CBPP2A alpha / PPP2R1A复合物PP2A alpha / PPP2R1A复合物PTPN1_PTP1B蛋白酪氨酸磷酸酶，非受体1型PTPN11_SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶，非受体11型PTPN11_SHP2-FLPTPN11_SHP2全长PTPN12_PTP-PEST酪氨酸蛋白磷酸酶非受体12型PTPN2_TC-PTP酪氨酸蛋白磷酸酶非受体2型PTPN6_SHP1蛋白酪氨酸磷酸酶，非受体6型PTPN7_LC-PTP酪氨酸蛋白磷酸酶非受体7型PTPRC_CD45受体型酪氨酸蛋白磷酸酶C.需要咨询更多信息，请联系技术服务部   Jacky  Tel：18221539942    邮箱：jacky@rebiosci.net

目前，有八种被批准用于治疗HIV感染的化合物，属于蛋白酶抑制剂。在所有类别的HIV药物中，蛋白酶抑制剂在药代动力学，药物相互作用和基于这些相互作用的剂量变化方面是*复杂的。除了HIV之外，蛋白酶抑制剂已经被批准用于治疗丙型肝炎，ACE抑制剂，正在研究与阿尔茨海默病，II型糖尿病和其他适应症有关的疾病。RBC提供75种HTS和IC50格式的蛋白酶测定。 Reaction Biology目前为蛋白酶分析提供以下服务：1，更大规模的HTS2，大规模单剂量，重复分析3，IC50分析 - 10剂量曲线拟合4，Ki测定5，定制分析开发名称                                                                                       同义词                                                                                数据ACE1血管紧张素转换酶ACE2ACE2N / AADAM10ADAM10N / ABACE1BACE1Calpain1Calpain1N / ACaspase 1Caspase 1Caspase 10Caspase 10Caspase 11Caspase 11Caspase 14Caspase 14Caspase 2Caspase 2Caspase 3Caspase 3Caspase 4Caspase 4Caspase 5Caspase 5Caspase 6Caspase 6Caspase 7Caspase 7Caspase 8Caspase 8Caspase 9Caspase 9组织蛋白酶B.组织蛋白酶B.N / A组织蛋白酶C.组织蛋白酶C.N / A组织蛋白酶D.组织蛋白酶D.组织蛋白酶E.组织蛋白酶E.组织蛋白酶G.组织蛋白酶G.N / A组织蛋白酶H.组织蛋白酶H.N / A组织蛋白酶L.组织蛋白酶L.N / A组织蛋白酶S.组织蛋白酶S.N / A组织蛋白酶V.组织蛋白酶V.N / A糜蛋白酶糜蛋白酶N / A糜蛋白酶糜蛋白酶N / A二肽基肽酶IV（DDP-IV）二肽基肽酶IV（DDP-IV）N / A二肽基肽酶IX（DPPIX）二肽基肽酶IX（DPPIX）N / A二肽基肽酶VIII（DPPVIII）二肽基肽酶VIII（DPPVIII）N / A弹性蛋白酶中性粒细胞弹性蛋白酶因子VIIa因子VIIaN / A因子Xa因子XaN / A因子XIa因子XIaN / AHIV蛋白酶HIV-1蛋白酶N / AKallikrein 1Kallikrein 1N / AKallikrein 12Kallikrein 12N / AKallikrein 13Kallikrein 13N / AKallikrein 14Kallikrein 14N / AKallikrein 5Kallikrein 5N / AKallikrein 7Kallikrein 7N / AMatriptase 2跨膜蛋白酶丝氨酸6MMP 1MMP 1MMP 10MMP 10N / AMMP 12MMP 12MMP 13MMP 13MMP 14MMP 14MMP 2MMP 2MMP 3MMP 3MMP 7MMP 7MMP 8MMP 8N / AMMP 9MMP 9脑啡肽酶脑啡肽酶N / A木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶N / A血浆激肽释放酶血浆激肽释放酶N / A纤溶酶纤溶酶N / A蛋白酶A.蛋白酶A.N / A蛋白酶K.蛋白酶K.N / ATACETACE凝血酶凝血酶N / A胰蛋白酶胰蛋白酶N / A类胰蛋白酶b2类胰蛋白酶b2N / A类胰蛋白酶g1类胰蛋白酶g1N / A尿激酶尿激酶N / A需要咨询更多信息，请联系技术服务部   Jacky  Tel：18221539942    邮箱：jacky@rebiosci.net

PDE抑制剂阻断磷酸二酯酶（PDE）的五种亚型中的一种或多种，从而防止细胞内第二信使环腺苷一磷酸（cAMP）和环鸟苷一磷酸（cGMP）被各自的PDE亚型灭活。PDE抑制剂包括：咖啡因，己酮可可碱 - 用于治疗循环相关适应症，长春西汀 - 用于治疗脑血管疾病，依诺昔酮用于心力衰竭，ibudilast - 支气管扩张剂和西地那非 - 用于治疗勃起功能障碍。PDE抑制剂是或可能有用的其他适应症包括肺动脉高压，抗精神病药，COPD，鼻炎，肾痛和糖尿病。 Reaction Biology目前为PDE分析提供以下服务：1，更大规模的HTS 2，大规模单剂量，重复分析  3，IC50分析 - 10剂量曲线拟合 4，Ki测  5，定制分析开发名称                       同义词                                                                                                                                                           数据PDE10AcAMP和cAMP抑制cGMP 3'，5'-环磷酸二酯酶10APDE1A钙/钙调蛋白依赖性3'，5'-环核苷酸磷酸二酯酶1APDE1B钙/钙调蛋白依赖性3'，5'-环核苷酸磷酸二酯酶1BPDE1C钙/钙调蛋白依赖性3'，5'-环核苷酸磷酸二酯酶1CPDE2AcGMP依赖性3'，5'-环磷酸二酯酶PDE3AcGMP抑制的3'，5'-环磷酸二酯酶APDE3BcGMP抑制3'，5'-环磷酸二酯酶B.PDE4AcAMP特异性3'，5'-环磷酸二酯酶4APDE4BcAMP特异性3'，5'-环磷酸二酯酶4BPDE4CcAMP特异性3'，5'-环磷酸二酯酶4CPDE4DcAMP特异性3'，5'-环磷酸二酯酶4DPDE5AcGMP特异性3'，5'-环磷酸二酯酶PDE7A高亲和力cAMP特异性3'，5'-环磷酸二酯酶7APDE8A高亲和力cAMP特异性和IBMX不敏感的3'，5'-环磷酸二酯酶8APDE9A高亲和力cGMP特异性3'，5'-环磷酸二酯酶9A需要咨询更多信息，请联系技术服务部   Jacky  Tel：18221539942    邮箱：jacky@rebiosci.net