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  • 细胞粘附

    细胞粘附

    细胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs) 是一类膜表面糖蛋白,它们以配体-受体特异性结合的方式介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的相互接触和结合并调节细胞功能,在胚胎发育和分化、正常组织结构的维持、炎症反应、免疫应答、凝血和血栓形成、创伤修复、肿瘤浸润与转移等许多生理和病理过程中发挥重要的生物学作用。  实验步骤:    1. 用10ug/ml的Fn预铺96孔板,70ul/孔,4℃过夜后,PBS洗3遍    2. 再用1% BSA于37℃封闭1h,PBS洗3遍    3. 待测细胞培养至对数生长期,消化细胞,用无血清培养基悬浮细胞,用血球计数板计数,调整浓度为5*105/ml    4. 分别接种于预铺Fn的96孔板中,每孔5000个细胞,每组设3个复孔。37 ℃孵育1 h后,PBS洗去未黏附的细胞    5. 5%戊二醛于4 ℃固定0.5 h,PBS 洗3遍;0.1%的结晶紫染色,室温静止0.5 h,PBS洗3 遍    6. 每孔加入100μl 10%的乙酸,5~10 min后用酶标仪检测595nm的吸光度值,用以表示黏附细胞的多少    7. 或者按照每孔加入100 ul甲醇,固定15min    8. 每孔加入100 ul吉姆萨染液,染色15min,PBS洗去染液    9. 倒置显微镜下随机取5个随机视野计数粘附细胞数量病拍照,统计结果服务周期:服务内容说明价格∕元实验周期细胞粘附建议3重复1200元/板5个工作日 温馨提醒:若用酶标仪计数为步骤1-6;若需要照片用步骤1-4,7-9 
  • 细胞增殖(MTT)

    细胞增殖(MTT)

    活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高。   实验步骤:  1. 收集对数期细胞  2. 酶消化  3. 血球计数板计  4. 换液  5. 加MTT固定,孵育  6. 加DMSO,振荡  7. 测OD值  我们提供:     1. 实验报告,包括实验材料、方法、步骤和实验结果     2. 原始数据,包括OD值和折线图   结果示意图:    服务周期:  服务内容说明价格∕元实验周期MTT贴壁细胞1700元/株3个工作日MTT悬浮细胞2200元/株3个工作日   温馨提醒:  1. 需对数期细胞  2. 提供实验分组,试剂刺激细胞时间和使用浓度 
  • 细胞侵袭

    细胞侵袭

    Matrigel是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分,含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖,铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上,能在DMEM培养基中重建形成膜结构,这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。滤膜孔径一般为8μm,而且膜孔都被Matrigel覆盖,细胞不能自由穿过,必须分泌水解酶,并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel的滤膜,这与体内情况较为相似。可通过这种模型来检测细胞的侵袭情况。通过体外模型来检测细胞的侵袭情况,主要应用于各种细胞因子对恶性肿瘤细胞侵袭和转移的影响及一些抑制血管生成的新药研究。实验步骤:  1. matrigel在4℃过夜融化  2. 稀释matrigel至终浓度1mg/ml  3. 在chamber上室底部中央垂直加入稀释后的matrigel。37℃温育4-5 h  4. 所有细胞培养试剂和Transwell chamber放在37℃恒温水浴箱温育  5. 消化培养至对数期的细胞,用无血清培养基悬浮细胞,计数,调整浓度为5*105/ml  6. 在下室加入含20%血清的培养基。上室加入细胞悬液,37 ℃、5%CO2、饱和湿度条件下继续培养24 h  7. 取出chamber,吸干上室液体,移到预先加入甲醇的孔中,室温固定30min  8. 取出chamber,吸干上室固定液,移到预先加入结晶紫染液的孔中,室温染色15-30min;用PBS冲洗浸泡数次,取chamber,先用干棉签将上室内液体吸去,再用棉签轻轻擦Matrigel凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞  9. 揭下膜表面上的细胞,晾干,封片  10. 显微镜下计数,统计结果;(若不用保存底膜,可省去步骤9)结果示意图:                服务周期:服务内容说明价格∕元实验周期细胞侵袭建议3重复1200/板3个工作日 温馨提醒:1. 提供105细胞2. 一块板共有24个小室,不足一块板按照一块板收费  
  • 细胞迁移

    细胞迁移

    将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞迁移运动等的影响。实验步骤:  1. 37℃温育细胞培养试剂和Transwell  2. 收集对数期细胞,悬浮细胞,计数  3. 下室加含血清培养液,上室加细胞悬液培养  4. 甲醇固定  5. 结晶紫染色  6. 中性树脂封片  7. 统计结果结果示意图:              服务周期:服务内容说明价格∕元实验周期细胞迁移(Transwell法)建议3重复120元/孔3个工作日温馨提醒:   1. 至少提供105细胞   2. 提供细胞相关信息
  • 透射电镜

    透射电镜

    利用电子射线(或称电子束)穿透样品,而后经多级电子放大后成像于荧光屏。透射率高,可以用来观察组织和细胞内部的超微结构以及微生物和生物大分子的全貌。能分辨0.1纳米以下的微细物质结构,放大倍数可达100万余倍。实验步骤:  1. 取材  2. 固定 (2.5%戊二醛)  3. 脱水          4. 包埋         5. 固化                        6. 超薄切片机切片 50-60 nm  7. 3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色  8. 透射电镜扫描拍照我们提供:  1. 每个标本提供两张照片  2. 提供实验方法、步骤、所用试剂、仪器,实验结果将以电子或书面形式提交给您结果示意图:                        服务周期:服务内容说明价格∕元实验周期透射电镜普通标本询价30个工作日 温馨提醒:  1. 确保细胞或组织取材新鲜,固定及时  2. 标本修成最大面宽度不超过2cm  3. 提供实验必要的信息,例如组织来源、实验目的和拍照要求
  • 扫描电镜

    扫描电镜

    在光学显微镜下小于0.2mm的一些细微结构,即便是再提高放大倍数也无法看清,这些结构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结构,就必须选择波长更短的光源,以提高显微镜的分辨率。目前扫描电镜的分辨力为6~10nm,扫描电镜的最大有效放大倍率为0.2mm/10nm=20000X。样品制备简单,放大倍数大,分辨率高,场景深,图像立体感丰富,易于识别和解释,广泛应用于生物学和医学等领域。实验步骤:        1. 清洗:一般用pH7.2磷酸盐缓冲        2. 固定:常规法用2.5﹪戊二醛前固定24h(放入0-4℃冰箱中)即可。一些特殊样品,如幼嫩的、含水量高的样品最好还是用四氧化锇后固定2h        3. 脱水:乙醇系列30﹪-50﹪-70﹪-85﹪-95﹪-100﹪(2次)逐级脱水,每级10-15min,块大的应适当摇动,保证脱水干净        4. 中间液代换:分两步。第一步用醋酸(异)戊酯:乙醇=1:1的混合液浸泡10min,第二步用醋酸异戊酯浸泡10min,适当摇动        5. 临界点干燥:代换后的样品转入样品篮中,放进预冷的临界点干燥仪样品室内,盖好室盖后注入液体二氧化碳,以淹没样品为准,先升温至15℃加热10min,再升温至35℃让其气化,观察液体全气化后慢慢放气,必须待气放尽才能开盖取样        6. 粘贴样品:一般样品可用双面胶带粘贴,如果样品块大,导电性差,必须用导电胶粘贴        7. 镀膜后入镜观察我们提供:1. 每个样本提供两张照片2. 提供具体的实验方法、步骤、所用试剂、仪器,实验结果将以电子或书面形式提交给您结果示意图:  服务周期:服务内容说明价格∕元实验周期扫描电镜提供2张照片询价30个工作日 温馨提醒:    1. 组织修成最大宽度不超过2cm大小    2. 提供组织相关信息,拍照要求,参考文献
  • 流式细胞周期

    流式细胞周期

    PI ,即碘化丙锭,可以与细胞内DNA 和RNA 结合,采用RNA酶将RNA消化后,通过流式细胞术检测到的与DNA 结合的PI 的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的 G0/G1 期具有二倍体细胞的DNA 含量(2N) ,而G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S 期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。因此,通过流式细胞术PI染色法对细胞内DNA 含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为 G0/G1 期,S 期和G2/ M期,并可通过特殊软件计算各时相的百分率。实验步骤:   1.  细胞铺板   2.  细胞同步化处理   3.  样品收集   4.  上机检测   5.  同步化数据分析结果示意图: 服务周期:服务内容说明价格∕元实验周期流式细胞周期建议3重复220元/样5个工作日  温馨提示:1. 提供108细胞2. 提供细胞处理方案
  • 流式细胞检测

    流式细胞检测

    流式细胞检测技术是利用流式细胞仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术。  实验步骤:  1. 用T25培养瓶培养各细胞株,代细胞生长达到80-90%融合后,弃掉旧培养液  2. 用2ml的PBS洗细胞两次后,加入胰酶消化细胞,显微镜下观察细胞变圆即可,加入4ml的完全培养液终止消化  3. 用移液器轻轻吹下细胞,将细胞混合液移入15ml离心管中,1000r/m离心10min,离心结束后,弃掉培养液上清,用5mlPBS 悬浮细胞沉淀,1000r/m离心10min  4. 弃上清后用500ul PBS悬浮细胞沉淀。之后分别加入抗体,4℃条件下孵育30min用流式细胞仪进行流式分析结果示意图:   服务周期:服务内容说明价格∕元实验周期流式检测不包括试剂盒费用60元/样/抗体3个工作日 温馨提醒:1.  流式分选建议用直标抗体2.  提供105细胞 
  • 流式细胞分选

    流式细胞分选

    流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单克隆分选,对复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等。   实验步骤:  1. 用T25培养瓶培养各细胞株,代细胞生长达到80-90%融合后,弃掉旧培养液  2. 用2ml的PBS洗细胞两次后,加入胰酶消化细胞,显微镜下观察细胞变圆即可,加入4ml的完全培养液终止消化  3. 用移液器轻轻吹下细胞,将细胞混合液移入15ml离心管中,1000r/m离心10min,离心结束后,弃掉培养液上清,用5mlPBS 悬浮细胞沉淀,1000r/m离心10min  4. 弃上清后用500ul PBS悬浮细胞沉淀。之后分别加入抗体,4℃条件下孵育30min用流式分选细胞仪进行流式分析  结果示意图:  服务周期:服务内容说明价格∕元实验周期流式分选不包括试剂盒费用450元/样3个工作日   温馨提醒:  1.  流式分选建议用直标抗体  2.  多通道筛选,需选用不同标记的一抗  3.  另外收取1200元开机费
  • 流式凋亡检测

    流式凋亡检测

    在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS) 由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。实验步骤:  1. 搜集细胞  2. 加入5μLAnnexin V-FITC,轻轻混  3. 室温避光孵育  4. 离心,加Annexin V-FITC重悬细胞  5. 加染色液,室温避光保存  6. 流式细胞仪检                  结果示意图:  服务周期:服务内容说明价格∕元实验周期流式凋亡建议3重复230元/样3个工作日   温馨提醒:    至少提供108个细胞 
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